1.ノコノコ
初代『スーパーマリオブラザーズ』のゲームから登場している定番キャラクターのノコノコ。マリオのゲームに登場する最も一般的な敵キャラクターで、基本的にはクッパ軍団の一般兵士という形で現れる。
数は多く、上空や地上でマリオを追いかける。ノコノコを大きくしたハンマーブロスや、メットと呼ばれる仲間達も登場することがある。
実はノコノコは、マリオの映画に登場するのは初めてではなく、1993年に公開された映画『スーパーマリオ 魔界帝国の女神』でもその姿を現している。
2.カロン
この世に未練を残し、全身が骨になったノコノコで、踏むと骨がバラバラになって崩れるが、しばらく経つと復活するという性質を持つ。映画内では、ワープ土管を使い、主人公マリオと別れた弟ルイージが、クッパ城の近くに辿り着つが、その後ルイージは、このカロンの大群に追われる。
1988年の人気ゲーム『スーパーマリオブラザーズ3』以来、マリオシリーズの定番のキャラクターとなっており、倒しても復活する性質や、その独特なビジュアルから厄介な敵キャラクターとして人気を誇っている。
3.クリボー
マリオシリーズを代表する敵キャラクターのクリボーは、映画内で何度か登場する。ゲームソフト『スーパーマリオブラザーズ』で登場し、主人公マリオの冒険で一番最初に出会う敵がこのクリボーだ。
元々はキノコ王国の城を守る兵士だったが、ある時クッパがキノコ王国を侵略したとき、大勢がクッパ軍団側に寝返ったと言われている。その茶色い色と不機嫌そうな顔は、マリオファンにとって定番中の定番だ。